文献分享| Cell：通用型CAR-T细胞在自身免疫性疾病上的首次成功应用

TyU19是一种“off-the-shelf”CAR-T细胞治疗产品，即将来自健康人体的T细胞制备成靶向CD19的CAR-T细胞后，通过CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除HLA-A、HLA-B、CIITA、TRAC和PD-1等基因，解决异体CAR-T疗法中免疫排斥的问题。本文报道了TyU19用于治疗1例难治性免疫介导性坏死性肌病（SPR-IMNM）患者和2例弥漫性皮肤系统性硬化症（dcSSc）患者，输注的TyU19在体内持续存在超过3个月，实现了完全B细胞耗竭。在6个月的随访期内，患者未出现细胞因子释放综合征或其他严重不良事件，相应疾病的临床反应指数评分显著改善，达到深度缓解。

1.TyU19的开发设计

UCAR-T技术的核心在于其off-the-shelf的特性，它使用来自健康人体的T细胞，经过CRISPR-Cas9基因编辑技术，使其能够高效靶向肿瘤细胞的同时不攻击健康细胞。TyU19产品的制备流程大致如下图2所示。根据介绍，用该方法每批次可获得超过100人份的TyU19产品（每份1×10⁶个 CAR+细胞）。为避免CRISPR-Cas9基因编辑产生脱靶效应，使用GUIDE-seq、SITE-seq和全基因组测序（WGS）来识别脱靶切割位点，未发现明显的脱靶效应，如图2所示。

图2. TyU19的构建

2. 患者情况及治疗方案

研究团队招募了3名难治性自身免疫病患者（NCT05859997），分别为1名难治性免疫介导性坏死性肌病（SPR-IMNM）患者和2名弥漫性皮肤系统性硬化症（dcSSc）患者。SRP-IMNM患者S0101临床表现为大腿肌肉斑片状肌坏死和肌纤维再生，过去10年先后接受多种免疫抑制剂联合治疗，自身抗体和肌酸激酶均处于非正常水平。S0102及S0103均为男性，患有严重的dcSSc。两例患者抗Scl-70自身抗体阳性，并有全身累及，包括皮肤、心脏、肺和胃肠道纤维化损伤。

三名患者入组后，除糖皮质激素外，在计划注射TyU19前所有免疫抑制剂均停止使用，患者接受标准预处理方案（按照批准的自体CAR-T产品），患者按10⁶ cells/kg静脉注射TyU19。在注射TyU19后6个月（M6）对患者进行了疗效和安全性的系统随访评估。

3. 治疗效果及安全性评估

输注TyU19后，研究团队检测了患者外周血中的CAR-T与B细胞数量。输注后三名患者CAR阳性率细胞占比高，表明CAR-T细胞在体内扩增；第21天CAR-T细胞CD3-百分比分别为99.92%、99.13%和98.15%，治疗后1个月3名患者的HLA-A、HLA-B、HLA-DR的阴性率均为85%以上，表明移植物抗宿主病（GVHD）的风险小。随着CAR-T细胞扩增，B细胞数量下降，且B细胞耗竭状态维持了2～3个月，在第六个月时在S0101和S0102中观察到B细胞数量恢复，如图3所示。

图3. 三名患者接受TyU19治疗后外周血的CAR-T、B细胞变化

研究团队对患者进行了为期6个月的系统性随访，评估TyU19临床疗效及安全性。SRP-IMNM患者（S0101）在TyU19治疗后肌肉损伤和炎症得到了有效控制，肌肉功能恢复，肌酸激酶水平的降低，大腿肌肉水肿和炎症浸润显著减少。dcSSc患者（S0102和S0103）接受TyU19治疗后获得全面的临床改善，体内的抗Scl-70自身抗体水平显著下降，皮肤纤维化逆转，肺部的纤维化和炎症改善，心脏水肿和纤维化逆转。

三名患者均未观察到CRS或GVHD等不良反应的临床症状，患者生命体征稳定，免疫球蛋白处于正常水平，C反应蛋白波动较小。这表明该治疗方案具有一定的安全性。

综上所述，TyU19细胞治疗后，三名难治性自身免疫疾病的患者B细胞耗竭，临床症状大幅改善，在6个月的随访期间得到持久地缓解。这表明TyU19在治疗难治性自免病种取得初步成功，但仍存在一些问题有待进一步验证及改善。如该研究仅分析3名患者临床数据，且CAR-T细胞来自单一供体，后续需要对更多患者群体中进一步验证疗效及安全性。尽管如此，通用型靶向CD19的CAR-T细胞疗法为难治性自身免疫性疾病提供了一种新的治疗选择。

4. 其它off-the-shelf平台

CAR-T细胞的问世为难治性自免病及肿瘤患者带来了希望，但其造价也均在100万元以上，价格高昂，让不少患者望而却步。因此，通用型CAR-T成为目前的研究热点，也为患者提供了更多机会。但通用型CAR-T面临在体内的持续扩增及移植排斥两大难题。针对持久性问题，可通过基因编辑给予CAR-T细胞更多的共刺激信号，延长CAR-T的持续时间；或者通过多次给药以巩固治疗，维持足够数量的CAR-T细胞，持续杀伤肿瘤细胞。此外，有研究表明敲除同种异体CAR-T细胞的HLA I类分子，可减少免疫排异，也能提高其免疫活性的持久度。针对移植排斥方面，目前已经开发了几种降低GVHD风险的方案：如使用干细胞来源的同种异体T细胞，使用病毒特异性记忆T细胞，或使用γδ T细胞，或在αβ T细胞中修饰致使T细胞原有的TCR缺失。

目前不少公司致力于研发异体通用型CAR-T细胞，适应症多为血液瘤及实体瘤。如科济药业开发的CT0590，是THANK-uCAR®平台技术下的同种异体CAR-T疗法，是靶向BCMA的主要用于治疗复发/难治多发性骨髓瘤，目前处于IIT临床研究阶段；亘喜生物开发GC502，是基于TruUCAR平台设计的CD19/CD7双靶向同种异体CAR-T疗法，正在IIT研究中；方德门达开发ThisCART-C，采用膜蛋白胞内滞留技术，是针对血液肿瘤的异体CAR-T产品，目前已开展多项临床研究；由于病毒特异性T细胞的TCR多样性远少于正常T细胞，Baylor College of Medicine使用人类疱疹病毒4型（EBV）刺激靶向CD30的 CAR-T细胞开发的CD30.CAR EBVSTs产品能够在不引起GVHD的情况下靶向CD30高表达的肿瘤细胞。

5. 总结

已有的临床数据表明，通用型CAR-T细胞已经在肿瘤治疗领域取得喜人成绩，而TyU19的推出是自身免疫疾病治疗领域的一个里程碑式的进展。相对于实体瘤领域，CAR-T在自免领域应用，无论是发病机制还是治疗过程中需要应对的风险，都或许是目前市场更合适的选择。随着更多通用型自免CAR-T的管线诞生，未来自免领域CAR-T或许可能领先于实体瘤取得临床成功，为更多的自免疾病患者带来曙光！